銳賽生物

靶標發現與功能驗證基因操作和基因組編輯藥物靶標開發生化/細胞水平驗證高通量高內涵分析GPCR/核受體檢測激酶檢測體外藥理學體外安全性評價藥代動力學毒理學評價藥代動力學/毒理學抗腫瘤藥理評價代謝類和心腦血管疾病藥理評價中樞神經系統藥理評價炎癥/自身免疫疾病藥理評價體內藥理學立項成果展示腫瘤個性化治療項目QPCRWB檢測ELISA檢測甲基化檢測SNP檢測高效液相色譜法(HPLC)蛋白質譜基因芯片核酸、蛋白分析服務目的基因的ORF克隆化學合成質粒載體構建siRNA的細胞轉染及篩選技術服務shRNA載體構建及篩選技術服務RNAi病毒包裝及篩選技術服務miRNA的表達載體構建及病毒包裝載體構建及篩選服務chipchip-seqIPCO-IPRNA免疫共沉淀(RIP)RNA pull down免疫共沉淀實驗服務慢病毒包裝腺病毒包裝細胞培養原代細胞分離干細胞誘導分化CCK-8檢測流式周期檢測流式凋亡檢測流式分選細胞流式鑒定細胞表面抗體活性氧(ROS)檢測線粒體膜電位檢測transwell檢測管腔形成實驗細胞黏附實驗細胞克隆形成實驗細胞免疫熒光檢測穩轉株構建雙熒光素酶檢測細胞干性成球能力磁珠分選細胞MDA(丙二醛)檢測酶活動力學檢測HDA檢測細胞實驗服務常規化學染色免疫組化(IHC)免疫熒光(IF)原位雜交(ISH)熒光原位雜交(FISH)原位末端標記染色(TUNEL)組織樣本處理拍照處理病理學檢測服務裸鼠皮下成瘤(CDX模型)人源腫瘤移植模型(PDX模型)糖尿病/肥胖模型心血管類疾病模型腎臟疾病模型肝臟疾病模型炎癥與自身免疫疾病模型呼吸系統疾病模型其他疾病模型動物實驗服務2019精品SCI2018精品SCI2017精品SCI往年精品SCI案例庫漂亮SCI案例庫科研轉化成果u.cad癌癥篩查檢測全外顯子組基因檢測其他疾病基因檢測生物信息數據分析服務腫瘤學領域研究平臺病理學中心實驗室心血管與代謝領域疾病研究平臺炎癥與自身免疫疾病領域研究平臺特發肺纖維化疾病領域研究平臺抗體藥物一體化臨床前研發平臺藥性評價平臺公司新聞價值金字塔三元悖論為客戶贏得榮譽誠覓英才內部推薦加入我們留言板聯系我們推薦朋友SCI論文發表獎勵制度科研資助POLOdeliverer3000CCK-8Annexin V-FITCAnnexin V-RFPECL 發光液細胞周期與凋亡檢測自研試劑基因質粒病毒免費送細胞庫動物飼料促銷活動

臨床醫學創新,轉化造福患者

動物實驗、載體構建、細胞實驗、病理學檢測、免疫沉淀、核酸蛋白分析

聯系電話:

021-80158420

酶活動力學檢測

enzyme activity



活性的測定方


按照對酶促反應時間的選擇不同分為:固定世間法、連續監測法

①固定世間法:測定酶促反應開始后一段時間內底物的減少量或產物的增加量。優點:簡單 缺點:難以確定反應時間段酶促反應是否處于線性期。

②連續檢測法:測定底物或產物隨時間的變化量,又稱為速率法。優點:能動態觀測酶促反應進程,可以明顯找到反應的線性期,結果準確可靠,標本和試劑用量少,可在較短時間內完成測定。缺點:對環境要求高,要求能夠精確地控制溫度,PH值和底物濃度等反應條件,要求儀器具有恒溫裝置及自動檢測功能。


酶活性測定的原理


直接測定反應生成物,酶促反應速率及其測定——以單位時間內反應物或生成物濃度的改變來表示。


2.png


酶活性測定方法


常見的酶活性檢測方法有:耦合反應、化學測定法、放射同位素法、測壓法、電極法、HPLC法等。

影響酶活性試驗的因素

①酶濃度

一般將底物過量,使酶可以充分與底物結合并發揮其催化功能。

②底物、輔因子的種類和濃度

1. 選合適的底物種類和濃度:

如所測的酶專一性不強,可作用于多種底物,首先就需決定選擇哪一類底物作為測此酶的底物。確定底物種類后,重要的問題是選擇底物的合適濃度。

2. 輔因子、活化劑的種類和濃度:

從廣義上說,凡能促進酶及反應物進入活化狀態從而加速酶催化反應的物質都能稱為輔因子,它包括種類很廣的物質。

③反應體系的最適pH、緩沖液的種類和濃度

在酶反應的其它條件不變的情況下,在不同pH下可得各種類型的酶活性與pH關系,將酶活性最高處的pH稱為最適pH 。

緩沖液含有大量離子,或影響酶蛋白的構型,或影響底物的解離程度等等,從而影響酶活性。

④溫度的控制

測定酶時都需要酶和底物在一定溫度下作用一段時間,在此期間,溫度有可能使酶失活,不同酶在此方面差異很大,目前常規工作實驗室越來越多的使用37℃,溫度升高,反應速度快,靈敏度高。

不論選用何種溫度測酶,由于酶反應受溫度影響很大,在測定時間內,反應體系的溫度變化應控制在±0.1℃內。應用國產普通恒溫水浴箱來測酶活性是不合適的,應使用帶有攪拌器的高級恒溫水浴。

⑤其它影響酶活性因素

其它因素中,對酶活性測定而言,最重要的是抑制劑的作用。


酶活性檢測實驗設計和注意事項


平行試驗:酶活性測定中,為了消除系統和操作誤差,每次測定都要設置正常、異常對照,待測樣品設置雙份,取結果的平均值,并綜合本實驗室的正常值、對照管的結果。常常用容易失活的酶作參考酶同時測定,只有當參考酶活性正常時才能肯定所得結果可靠,排除假陽性。

防止酶失活:這是實驗穩定、成功的關鍵。細胞分離、超聲粉碎、離心等操作都要在4°C條件下進行,標本采集后要立即進行處理。


酶活性檢測實驗結果展示


5.png


酶活性測定反應終止方法


①改變PH值使蛋白質變性沉淀

②急熱100度

③用1%SDS中止反應,注意protease K等在SDS下仍有活性。

④金屬離子參與反應的,可加入EDTA

⑤加入抑制劑

⑥放射法測定時可加入大量非放射性基質

Q Q 客服
 
 
 
 
 工作時間
周一至周五 :9:00-18:00
 聯系方式
客服熱線:021-80158420
郵箱:service@research-bio.com
注:不用QQ的可點擊微信或網頁右側在線咨詢
微信咨詢

微信咨詢

副標題

 
 
 
 

肖祥.jpeg


         

滬公網安備 31011502005995號