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高效液相色譜法(HPLC)

chromatography



實驗原理


以高壓液體為流動相的液相色譜分析法稱高效液相色譜法(HPLC)。其基本方法是用高壓泵將具有一定極性的單一溶劑或不同比例的混合溶劑泵入裝有填充劑的色譜柱,經進樣閥注入的樣品被流動相帶入色譜柱內進行分離后依次進入檢測器,由記錄儀、積分儀或數據處理系統記錄色信號或進行數據處理而得到分析結果。

高效液相色譜儀(HPLC)用液體為流動相的色譜分離分析方法。它在經典色譜理論的基礎上,采用了高壓泵、化學鍵合固定相高效分離柱、高靈敏專用檢測器等新實驗技術建立的一種液相色譜分析法。高效液相色譜儀(HPLC)適于溶解后能制成溶液的樣品,不受樣品揮發性和熱穩定性的限制,對分子量大、難氣化、熱穩定性差的生化樣品及高分子和離子型樣品均可檢測。用途廣泛,占有機物的80%。


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高效液相色譜(HPLC)優點


  1. 高壓:液相色譜以液體作為流動相(稱為載液),液體流經色譜柱時,受到的阻力較大,為了能迅速地通過色譜柱,必須對載液施加高壓。在現代液體色譜中供液壓力和進樣壓力都很高,一般可達到15~30MPa,甚至可達MPa

  2. 高速:高效液相色譜的流速較之經典液體色譜快得多,一般可達l—10mL/min, 個別可高達100mL/min以上,這已近似于氣相色譜的流速。 高效液相色譜法所需的分析時間較之經典液相色譜法少得多,一般少于1h 。

  3. 高效:氣相色譜的分離效能很高,高效液相色譜的柱效則更高,一般約可達 60000理論塔板/米;近來研究出許多新型固定相,使分離效率大大提高。

  4. 高靈敏度:紫外檢測器的最小檢測量可達毫微克數量級(10-9 g);熒光檢測器的靈敏度可達10-11g。高效液相色譜的高靈敏度還表現在所需試樣很少;微升數量級的樣品就足以進行全分析。


實驗結果展示


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