銳賽生物

靶標發現與功能驗證基因操作和基因組編輯藥物靶標開發生化/細胞水平驗證高通量高內涵分析GPCR/核受體檢測激酶檢測體外藥理學體外安全性評價藥代動力學毒理學評價藥代動力學/毒理學抗腫瘤藥理評價代謝類和心腦血管疾病藥理評價中樞神經系統藥理評價炎癥/自身免疫疾病藥理評價體內藥理學立項成果展示腫瘤個性化治療項目QPCRWB檢測ELISA檢測甲基化檢測SNP檢測高效液相色譜法(HPLC)蛋白質譜基因芯片核酸、蛋白分析服務目的基因的ORF克隆化學合成質粒載體構建siRNA的細胞轉染及篩選技術服務shRNA載體構建及篩選技術服務RNAi病毒包裝及篩選技術服務miRNA的表達載體構建及病毒包裝載體構建及篩選服務chipchip-seqIPCO-IPRNA免疫共沉淀(RIP)RNA pull down免疫共沉淀實驗服務慢病毒包裝腺病毒包裝細胞培養原代細胞分離干細胞誘導分化CCK-8檢測流式周期檢測流式凋亡檢測流式分選細胞流式鑒定細胞表面抗體活性氧(ROS)檢測線粒體膜電位檢測transwell檢測管腔形成實驗細胞黏附實驗細胞克隆形成實驗細胞免疫熒光檢測穩轉株構建雙熒光素酶檢測細胞干性成球能力磁珠分選細胞MDA(丙二醛)檢測酶活動力學檢測HDA檢測細胞實驗服務常規化學染色免疫組化(IHC)免疫熒光(IF)原位雜交(ISH)熒光原位雜交(FISH)原位末端標記染色(TUNEL)組織樣本處理拍照處理病理學檢測服務裸鼠皮下成瘤(CDX模型)人源腫瘤移植模型(PDX模型)糖尿病/肥胖模型心血管類疾病模型腎臟疾病模型肝臟疾病模型炎癥與自身免疫疾病模型呼吸系統疾病模型其他疾病模型動物實驗服務2019精品SCI2018精品SCI2017精品SCI往年精品SCI案例庫漂亮SCI案例庫科研轉化成果u.cad癌癥篩查檢測全外顯子組基因檢測其他疾病基因檢測生物信息數據分析服務腫瘤學領域研究平臺病理學中心實驗室心血管與代謝領域疾病研究平臺炎癥與自身免疫疾病領域研究平臺特發肺纖維化疾病領域研究平臺抗體藥物一體化臨床前研發平臺藥性評價平臺公司新聞價值金字塔三元悖論為客戶贏得榮譽誠覓英才內部推薦加入我們留言板聯系我們推薦朋友SCI論文發表獎勵制度科研資助POLOdeliverer3000CCK-8Annexin V-FITCAnnexin V-RFPECL 發光液細胞周期與凋亡檢測自研試劑基因質粒病毒免費送細胞庫動物飼料促銷活動

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miRNA的表達載體構建

vector construction



實驗原理


miRNA是在真核生物中發現的具有調控功能的內源性非編碼RNA,大小約20~25個核苷酸。我們根據成熟miRNA序列信息,合成含有莖環結構的前體miRNA連接至含側翼序列的表達載體中(見圖6.1),將其轉染/病毒包裝感染進入細胞后,由II型啟動子(CMV)啟動表達,經核酸酶的剪切加工,組裝RNA誘導的沉默復合體,通過堿基互補配對的方式識別靶mRNA,并根據互補程度的不同指導沉默復合體降解靶mRNA或者阻遏靶mRNA的翻譯。


圖片4.png

圖6.1miRNA表達載體示意圖


技術應用


通過過表達miRNA研究其功能并進行靶點篩選的后期研究工作


實驗流程




實物

數據信息

實驗周期

客戶提供

miRNA序列信息

10周

我們提供

miRNA表達質粒/菌株、病毒液

基本實驗步驟、測序報告



實驗結果展示

圖1 miRNA 慢病毒包裝實驗結果
A:miRNA 慢病毒表達載體測序結果;B:miRNA 慢病毒感染 293 細胞照片。


TROUBLESHOOTING


實驗問題

原因

推薦解決方法

miRNA過表達質粒構建過程中未能篩選到陽性克隆?

試劑問題

注意OIigo片段的純化級別、退火buffer、連接酶體系、感受態細胞的效率等。

miRNA過表達質粒測序失敗?

發夾結構影響測序

更換技術能力更好的測序公司。

miRNA過表達質粒對細胞轉染效率低?

轉染條件不佳

采用適合該細胞的轉染試劑,優化轉染條件。

細胞本身難轉染

采用病毒介導miRNA的過表達。


常見問題FAQ


Q :為什么選擇貴公司進行miRNA的表達載體構建工作?

A我們提供miRNA表達載體構建,可以在每一步操作為您把關:Oligo片段經PAGE純化,質量優良,保證無堿基突變的情況;在載體構建以及測序驗證過程中操作經驗豐富,可以快速為您構建好所需的miRNA表達載體。


Q:什么是miRNA mimics, miRNA inhibitor?其應用有哪些?

AmiRNA mimics:運用化學合成的方法,模擬生物體內源的miRNA,特異性增強內源型miRNA的功能。

miRNA inhibitor:化學修飾的專門針對細胞中特異的靶miRNA的抑制劑,可特異高效的抑制生物體內源性miRNA的活性。

以上化學合成片段獲取方便快捷,短時間內可以轉染細胞,增加或抑制miRNA的活性,檢測miRNA所調節的基因表達和對信號通路的影響,對闡明miRNA在諸如細胞發育、增值、分化和凋亡中的機理有重要意義。


Q:miRNA表達載體相對化學合成的miRNA mimics的優勢有哪些?

AmiRNA表達載體相對化學合成miRNA可以進行質粒擴增、抽提,轉染細胞或包裝慢病毒感染細胞后,表達時長高于miRNA mimics,并且后續可以進行穩轉株的構建工作;另外miRNA表達載體含GFP熒光標記,表達熒光更加穩定,方便進行轉染或感染后的示蹤。


參考文獻

1. Ambros V.MicroR NAs: Tiny R egulators with Great Potential. Cell 2001;107(7):823-826.

2. Ambros V.The functions of animal micro R NAs.Nature 2004;431(7006):350-355.

3. Bartel DP.MicroR NAs:genomics,biogenesis, mechanism, and function.Cell 2004;116(2):281-297.

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