銳賽生物

靶標發現與功能驗證基因操作和基因組編輯藥物靶標開發生化/細胞水平驗證高通量高內涵分析GPCR/核受體檢測激酶檢測體外藥理學體外安全性評價藥代動力學毒理學評價藥代動力學/毒理學抗腫瘤藥理評價代謝類和心腦血管疾病藥理評價中樞神經系統藥理評價炎癥/自身免疫疾病藥理評價體內藥理學立項成果展示腫瘤個性化治療項目QPCRWB檢測ELISA檢測甲基化檢測SNP檢測高效液相色譜法(HPLC)蛋白質譜基因芯片核酸、蛋白分析服務目的基因的ORF克隆化學合成質粒載體構建siRNA的細胞轉染及篩選技術服務shRNA載體構建及篩選技術服務RNAi病毒包裝及篩選技術服務miRNA的表達載體構建及病毒包裝載體構建及篩選服務chipchip-seqIPCO-IPRNA免疫共沉淀(RIP)RNA pull down免疫共沉淀實驗服務慢病毒包裝腺病毒包裝細胞培養原代細胞分離干細胞誘導分化CCK-8檢測流式周期檢測流式凋亡檢測流式分選細胞流式鑒定細胞表面抗體活性氧(ROS)檢測線粒體膜電位檢測transwell檢測管腔形成實驗細胞黏附實驗細胞克隆形成實驗細胞免疫熒光檢測穩轉株構建雙熒光素酶檢測細胞干性成球能力磁珠分選細胞MDA(丙二醛)檢測酶活動力學檢測HDA檢測細胞實驗服務常規化學染色免疫組化(IHC)免疫熒光(IF)原位雜交(ISH)熒光原位雜交(FISH)原位末端標記染色(TUNEL)組織樣本處理拍照處理病理學檢測服務裸鼠皮下成瘤(CDX模型)人源腫瘤移植模型(PDX模型)糖尿病/肥胖模型心血管類疾病模型腎臟疾病模型肝臟疾病模型炎癥與自身免疫疾病模型呼吸系統疾病模型其他疾病模型動物實驗服務2019精品SCI2018精品SCI2017精品SCI往年精品SCI案例庫漂亮SCI案例庫科研轉化成果u.cad癌癥篩查檢測全外顯子組基因檢測其他疾病基因檢測生物信息數據分析服務腫瘤學領域研究平臺病理學中心實驗室心血管與代謝領域疾病研究平臺炎癥與自身免疫疾病領域研究平臺特發肺纖維化疾病領域研究平臺抗體藥物一體化臨床前研發平臺藥性評價平臺公司新聞價值金字塔三元悖論為客戶贏得榮譽誠覓英才內部推薦加入我們留言板聯系我們推薦朋友SCI論文發表獎勵制度科研資助POLOdeliverer3000CCK-8Annexin V-FITCAnnexin V-RFPECL 發光液細胞周期與凋亡檢測自研試劑基因質粒病毒免費送細胞庫動物飼料促銷活動

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化學合成

Chemical translation



實驗原理


基因的化學合成即人工合成寡核甘酸片段,通過PCR拼接的方法,獲得所需要的基因表達序列或者啟動子等功能性元件片段。基因化學合成使合成任何基因序列成為可能。


技術應用


序列密碼子優化,高效表達目的基因

基因、蛋白功能研究


實驗流程




實物

數據信息

實驗周期

客戶提供

目的基因NCBI登陸號

4周

我們提供

質粒/菌株

基本實驗步驟、電池圖片、測序報告


實驗結果展示


QQ圖片2.png

1.2目的片段的酶切電泳結果(載體片段4700bp,目的片段900bp)


TROUBLESHOOTlNG


實驗問題

原因

推薦解決方法

PCR擴增非特異性條帶過多?

PCR反應條件

建議提高退火溫度。

PCR擴增目標條帶過弱?

PCR反應條件

建議增加DNA聚合酶的量或鎂離子濃度。

PCR未能擴增得到目標序列?

復雜基因結構

基因序列中存在復雜的二級結構,GC含量過高,串聯重復序列都可能導致擴增失敗。

測序結果中含有很多突變位點?

聚合酶保真度

采用高保真聚合酶進行擴增。

長片段引物純度低

重新合成長片引物


常見問題 FAQ


Q:基因化學合成相對基因調取有哪些優勢?

A :化學合成法雖不如基因調取(ORF)價格便宜,但在以下情況下具有無法比擬的優勢:1)基因表達豐度低,難以通過ORF克隆獲得目的基因序列;2)對序列進行密碼子優化以提高表達量,如在原核表達系統中表達真核基因序列;3)化學合成序列與目標序列完全一致,不存在突變位點或SNP4)用于微芯片的大量cDNA合成。


Q:可否將需要的酶切點位點增加至基因兩端?

A:可以根據客戶的后期實驗需求,在目的基因兩端增加合適的限制性內切酶切位點,客戶獲得基因克隆后可直接通過酶切亞克隆至所需的載體中,方便快捷,避免了長片段PCR擴增產生點突變的可能。


Q:什么是Kozak序列,為什么建議增加在基因起始密碼子前?

A:科學家Kozak通過研究起始密碼子ATG周邊堿基定點突變后對轉錄和翻譯所造成的影響,總結出在真核生物中起始密碼子兩端序列為:

G/N-C/N-C/N-ANNATGG,如GCCACCATGG、GCCATGATGG時轉錄和翻譯效率最高,特別時-3位的A對翻譯效率非常重要。因此這些序列被成為Kozak序列,常被應用于表達載體的構建中。


Q:進行蛋白表達時,可否增加蛋白分泌信號肽?

A蛋白胞外分泌表達時,采用經優化的蛋白分泌信號肽是提高蛋白產量的重要途徑之一。注意信號肽與靶蛋白的連接,不要由于錯誤的連接導致移碼后不能夠正常表達信號肽后面的靶蛋白。


Q:我應該如何讀取測序報告?

A測序結果中有兩種文件類型:

“.sep”是基因序列文件,可以用記事本或DNAMAN等生物學軟件打開;

“.ab1:是測序峰圖文件,可以用chromas軟件大擴,如圖1.3所示:

QQ圖片3.png

圖1.3測序報告截圖


參考文獻

1. J e a n  P e c c o u d. G e n e S y n t h e s i s: M e t h o d s and Protocols. Humana Press,2012.

2. Benjamin Lewin. Genes IX [M]. Pearson Education,2007.

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